行爲學避暗實驗:大鼠避暗箱-避暗實驗視頻分析系統-大鼠避暗系統
1、學習小白鼠學習記憶行爲檢測方法
2、學習小鼠避暗自動測試儀的使用方法。
3. 瞭解影響學習記憶功能的一些因素。
齧齒類動物系夜行性動物,喜歡黑暗的地方,而回避光亮之地。它將設法逃向暗處,此時在暗處給予其電刺激,小鼠會被迫逃回明亮處,並獲得記憶。根據此原理設計的實驗爲一次性被動迴避反應實驗。被動迴避反應(Passive Avoidance Response)爲二十世紀60年代後期發展起來的、普遍用於檢測小動物學習記憶能力的一種動物模型。反應特徵:動物必須學會躲避可怕的事件,而抑制其天然本性。被動迴避反應有:避暗法(又稱步入法step-through test)、跳臺法(又稱步下法step-downtest)等。
小白鼠常用手術器械、亞硝酸鈉、東莨菪鹼(scopolamine,Scop.)、生理鹽水、35 %酒精。
本系統是通過攝像視頻跟蹤方式的分析系統。該系統以攝像系統、電腦、激器三大部件作爲硬件基礎,實驗過程中不需要對實驗動物作特殊標記。軟件識別算法採用了軌跡預測、局部和全局相結合的搜索技術,可以任意追蹤和記錄實驗動物(大小鼠)的位置,採用開放式、系統可擴展,結果可導入到Excel,並進行直方圖曲線軌跡的處理,便於用戶在SPSS、SAS等生物分析統計軟件中作進一步分析處理。
技術參數:避暗實驗系統詳情zi詢正華生物儀器:0561- 60 62 - 307,
1、活動箱外部尺寸:700× 260× 430mm,框架採用鋁合金及亞克利
2、白箱與黑箱內部分別尺寸:250× 185× 300mm
3、輸入電壓:AC220V
4、電柵限流調整範圍:0.04~3.5mA
5、調整步長:0.02mA,電流誤差小於0.04mA
6、電柵電壓調整範圍:30~120V(方波峰值),調整步長1V
7、各電柵上的方波刺激頻率:96Hz,誤差1%
*完整參數請在評論區留言
1. 實驗儀器小動物學習記憶行爲檢測技術--避暗法小鼠避暗自動測試儀由控制器和活動箱兩部分組成,可同時對6只小鼠進行實驗。明暗實驗箱之間有一小門供動物進出,當動物進入暗室被電擊時,它可自動記錄小鼠第一次從明室進入暗室的潛伏期和受到電擊的次數,還可通過按鍵靈活地選擇刺激電壓和設置實驗時間。
2. 實驗程序:2.1適應:將動物頭朝室壁放入明室,兩室之間的門洞敞開,讓動物在兩室內自由活動2-3分鐘,取出後放回飼養籠。2.2訓練:第二天, 將動物放入明室, 它很快鑽入暗室, 連接兩室的門洞關閉,同時啓動電刺激器, 動物足部受電擊。如果動物在第一次訓練時超過100秒不進暗室, 淘汰之或用手把它輕輕趕進暗室。
2.3重測試:訓練後24小時(第三天),再次將動物放入明室,進行重測試。
(1)記錄動物自明室進入暗室的潛伏期,可作爲判斷給藥後動物行爲是否有變的一個指標。若藥物致使動物鎮靜,則潛伏期顯著長於對照組。
(2)記錄動物受到電擊後的反應,如劇烈嘶叫並跳躍,評爲A級反應;微弱尖叫,評爲B級反應;不叫,評爲C級反應。受到電擊後動物一般均跳躍。C級反應常伴動物跳躍,動物雖不尖叫,但正常動物均能感受電擊疼痛,顯示好的記憶成績。C級反應多見於雄性動物。A級反應多見於雌性動物。該記錄可作爲動物痛域是否變化的一個輔助觀察指標。
按照信息論將記憶簡單劃分爲:記憶的獲得(也即學習過程、信息的獲得過程)、記憶的鞏固(信息的保持過程)、記憶的再現(信息的提取過程)時,我們可依此來篩選作用於記憶不同階段的認知藥物。
在訓練前、後或重測前給損傷動物記憶的藥物,可分別觀察該藥物對記憶不同階段的影響,在此之前給動物待檢測認知藥物,即可依據實驗結果判斷該認知藥物對抗損傷藥物的效果。爲簡化篩選工作,常選用實驗步驟較少的小動物學習記憶測試方法,現以步入法爲例說明如下。
A、記憶獲得過程
1. 建立記憶獲得障礙模型:在動物進行電擊訓練之前15-20分鐘,給動物腹腔注射氫溴酸東莨菪鹼(膽鹼能M受體拮抗劑,HBr-Scopalamine),小鼠:3mg/kg,可見給藥組動物出現探究行爲,訓練時在明室內駐留時間略長於對照組,進入暗室後受到電刺激時的反應與對照組相似:嘶叫或跳躍。24小時後當再次將動物放入明室時,動物進入暗室的潛伏期顯著低於對照組,即製備成功記憶障礙模型。2. 待測藥物的服用:根據待檢測藥物在動物體內的作用高峰時間,於相應時間給動物服藥,如口服藥物,可於訓練前1小時給動物灌服待檢測藥物,然後再於訓練前15-20分鐘給動物損傷記憶獲得的藥物,如氫溴酸東莨菪鹼等。
B、記憶鞏固過程
1. 建立記憶鞏固障礙模型:動物電擊訓練結束後立即給動物腹腔注射蛋白質合成抑制劑環己酰亞胺(Cycloheximide,小鼠:90-100mg/kg)抑制蛋白質合成,或皮下注射NaNO2(小鼠:120mg/kg)導致動物短暫性缺氧,或給動物施行頭部瞬間電休克。然後放回飼養盒內,24小時後重測試。2. 待測藥物的服用:若是口服藥物,於電擊訓練前藥物作用高峰期(一般選1小時前)給動物灌服藥物。若是腹腔注射藥物,一般於訓練前半小時注射。然後給動物電擊訓練,訓練後立即給損傷記憶鞏固藥物或其它實驗因素,24小時後重測試,可檢測認知藥物對記憶鞏固障礙的對抗作用。
C、記憶再現過程
1. 建立記憶再現障礙模型於動物重測試之前15分鐘給小鼠灌服酒精(35%,0.1ml/10g鼠重),15分鐘後進行重測試。可見小鼠記憶提取過程受到損傷。2. 待測藥物的服用:於動物重測試之前1小時給動物口服待檢藥物。
注意:該損傷只有在重測前10-30分鐘灌胃酒精才起作用, 時間長於30分鐘則無效。該劑量酒精只對較不鞏固、一次性記憶有損傷作用,而對小鼠需經多次訓練而獲得的較鞏固的記憶的再現無影響。